熒光分光光度計(jì)的原理和優(yōu)缺點(diǎn)介紹 熒光分光光度計(jì)是一種用于掃描液相熒光標(biāo)記發(fā)出的熒光光譜的儀器。它可以提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等多種物理參數(shù)，從各個(gè)角度反映分子的鍵合和結(jié)構(gòu)。
熒光分光光度計(jì)的基本原理：
高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外線和藍(lán)紫色光通過(guò)濾光片照射到樣品池中，樣品中的熒光物質(zhì)被激發(fā)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過(guò)濾和反射后，被光電倍增管接受，然后以圖形或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。物質(zhì)的熒光是由處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光而變成激發(fā)態(tài)而產(chǎn)生的。這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，在返回基態(tài)的過(guò)程中，部分能量又以光的形式返回。發(fā)射，產(chǎn)生熒光。
由于不同物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)不同，激發(fā)態(tài)能級(jí)分布具有不同的特點(diǎn)，這體現(xiàn)在熒光上，因?yàn)楦鞣N物質(zhì)都有自己*的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；因此，可以利用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜之間的差異來(lái)定性識(shí)別物質(zhì)。
熒光分光光度計(jì)的優(yōu)缺點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，可用于掃描液相熒光標(biāo)記物發(fā)出的熒光光譜，不僅可以做一般的定量分析，還可以推斷分子在各種環(huán)境中的構(gòu)象變化，從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能。
缺點(diǎn)：
1、熒光的光強(qiáng)不高，線性情況有時(shí)不理想；
2. 某些反應(yīng)熒光持續(xù)時(shí)間短；
3.熒光的發(fā)散方向不集中，不像透射光那么集中，強(qiáng)度高；
4、受某些離子的干擾影響，熒光會(huì)湮滅，測(cè)試速度一定要快。 |
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