多肽合成儀功能操作 工作原理
多肽合成儀采用固相合成作為反應(yīng)原理。在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中，按已知的順序（順序，一般是從C端到N端再到N端）不斷加入氨基酸進行反應(yīng)，合成，操作，最終得到多肽載體。固相合成法大大降低了每一步產(chǎn)品純化的難度。為了防止副反應(yīng)的發(fā)生，參與反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈受到保護。羧基末端是游離的，必須在反應(yīng)前活化。有兩種固相合成方法，即 Fmoc 和 tBoc。因為Fmoc相比tBoc有很多優(yōu)勢，大部分都是用Fmoc的方法合成的，但是對于一些短肽來說，tBoc由于產(chǎn)量高的優(yōu)勢還是被很多公司采用。
具體的合成包括以下循環(huán)：
1）脫保護：Fmoc保護的柱子和單體必須用堿性溶劑（哌啶）脫去氨基的保護基。
2) 活化和交聯(lián)：下一個氨基酸的羧基被活化劑活化。活化的單體與游離氨基反應(yīng)形成肽鍵。在這一步中，使用了大量的超濃縮試劑來推動反應(yīng)完成。循環(huán)：兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)，直至合成完成。
3) 洗脫脫保護：肽從柱子上洗脫下來，其保護基通過脫保護劑（TFA）洗脫和脫保護。
基本組件
反應(yīng)堆
數(shù)百年來，制藥工業(yè)中最常見的反應(yīng)器/反應(yīng)器設(shè)備類型是玻璃。由于其*透明和耐腐蝕，已被許多化學和生物專家使用。多肽合成過程需要操作人員直觀監(jiān)控，合成后可在線切割（切割試劑TFA的強腐蝕性極大地限制了反應(yīng)器的材質(zhì)）。這些要求限制了反應(yīng)器由玻璃制成。玻璃制反應(yīng)釜在制造工藝上有很大的難度限制：①燒成工藝：研磨精度*，正如國內(nèi)很多設(shè)備不能滿足漏液漏氣要求，玻璃壁的均勻性. ②具有攪拌手柄和密封裝置的完整加工工藝 ③防爆處理
氨基酸儲罐
用于儲存氨基酸粉末或預(yù)活化的溶解氨基酸溶液。小型合成器的氨基酸儲罐數(shù)量一般在20-40個之間，以保證全自動縮合反應(yīng)在無人看管的情況下順利進行。大型合成器根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模有不同的配置。
溶劑儲罐
用來存放有機溶液，如DMF、PIP等。
量筒用于測量氨基酸溶液和其他試劑的合成量。它需要一個精密傳感器來設(shè)計秤并將信息返回給計算機控制程序。由于早期的恒壓法偏差大，操作繁瑣，故采用此法進行測量。觸發(fā)器的數(shù)量取決于不同客戶的要求，不同品牌略有不同。
轉(zhuǎn)移瓶
傳感器
多端觸發(fā)自感應(yīng)定量測量方法，直觀、科學、相對誤差zui低。代替早期的恒壓法，避免了每天進行大量的數(shù)學運算，運算更簡單，測量誤差值可控制在1%以內(nèi)。
廢液桶
廢液桶通常是一個大的HDPE桶，以保證良好的通風。同時，需要安裝感應(yīng)裝置，隨時檢測廢液，避免溢出。
控制配件
電磁閥
肽合成儀中的電磁閥是一個靈敏的附件，它控制著液路的串聯(lián)和閉合回路，在氨基酸轉(zhuǎn)移與測定、溶劑轉(zhuǎn)移與測定兩個步驟中起著非常重要的作用。不同品牌的合成器的電磁閥設(shè)計和布置略有不同。
控制面板
控制面板通常包含光敏元件、一些控制電磁閥和傳感器控制組。它與上位機和合成儀的控制系統(tǒng)統(tǒng)一聯(lián)動，完成多肽合成的全過程。
軟件系統(tǒng)
肽合成儀的操作軟件。不同品牌的合成器有不同的注冊軟件。
檢測方法
a) 紫外線監(jiān)測器
在多肽合成儀中，UV Monitor等偶聯(lián)效應(yīng)在線檢測裝置往往是可選裝置，客戶可根據(jù)實驗需要購買。它的作用是讓操作者可以直觀的看到肽合成中各個氨基酸的偶聯(lián)效果，從而針對特定的序列調(diào)整合成設(shè)置，最終達到最佳的合成效果。
對于不熟悉多肽合成儀操作的用戶來說，UV Monitor非常重要。
b) 試劑檢測
茚三酮檢測原理
未購買在線檢測配件的肽合成儀用戶也可以使用試劑檢測方法進行基本的偶聯(lián)效應(yīng)測定實驗。
在固相肽合成中，連接效率主要通過檢測樹脂上的游離氨基來確定。該檢測方法稱為Kaiser方法。檢測結(jié)果，如果有游離氨基，則顯示藍色或紅棕色（pro、ser、His）。
Kaiser 試劑包括： A、6%茚三酮的乙醇溶液； B、80% 苯酚的乙醇溶液溶液：C、2% 0.001M KCN吡啶溶液 制劑中的吡啶需用茚三酮處理，再蒸餾后使用。檢測過程中，取少量樹脂，加入A、B、C各2-3滴，100℃加熱1-2分鐘。如果溶液呈藍色，或樹脂呈藍色或紅棕色，則表明存在游離氨基。否則，表明連接完成。 |
